Invitrogen™ Platinum™ Tfi Exo(-) DNA Polymerase

Bei der Platinum™ Tfi-Exo(-) DNA-Polymerase handelt es sich um eine rekombinante Tfi-Exo(-) DNA-Polymerase, die mit einem proprietären Antikörpermix komplexiert ist, der die Polymerase-Aktivität bei Umgebungstemperatur hemmt und so ein Ansetzen der Reaktion bei Raumtemperatur ermöglicht. Die Aktivität wird nach der ersten Denaturierung während der PCR bei 94 °C wiederhergestellt. Das bietet einen automatischen „Heißstart“ für eine höhere Spezifität, Empfindlichkeit und Ausbeute. Tfi-Exo(-) DNA-Polymerase wird aus E. coli. aufgereinigt, wobei klonierte Mutanten des Thermus filiformis-DNA-Polymerase-Gens exprimiert werden. Dieses Enzym weist eine 5'→3'-Polymeraseaktivität, jedoch keine 5'→3'- und 3'→5'-Exonukleaseaktivität auf und bietet so eine verbesserte Ausbeute und Robustheit. Die Tfi-Exo(-) DNA-Polymerase ist hitzestabil und synthetisiert DNA bei erhöhten Temperaturen aus einzelsträngigen Templates in Gegenwart eines Primers.

Anwendungen
Die Platinum™ Tfi-Exo(-) DNA-Polymerase kann in Protokollen verwendet werden, die derzeit die Platinum™ Taq DNA-Polymerase ohne Modifikation verwenden. Die PCR-Leistung ist mit der von Platinum™ Taq in Bezug auf Ausbeute, Spezifität, Genauigkeit und Robustheit vergleichbar. Genau wie Platinum™ Taq verfügt auch die Platinum™ Tfi-Exo(-) DNA-Polymerase über eine Template-unabhängige terminale Transferase-Aktivität, die ein einzelnes Desoxyadenosin (A) an das 3'-Ende von PCR-Produkten anhängt.