IBA Solutions For Life Science StarGate™ Upstream-Fusionsvektor pNFUSE-IBA

Stargate™ bietet ein einfaches Klonierungsverfahren zur schnellen und hocheffizienten Subklonierung eines beliebigen Gens von Interesse (GOI) zur Verwendung in der funktionellen Expression, Aufreinigung, Detektion und Immobilisierung oder Trennung von rekombinanten Proteinen.

• Minimale zusätzliche Modifikation des Gens durch kurze kombinatorische Stellen
• Inhärente hochgradige Klonierungseffizienz durch eine gezielte Reaktion (kein Gleichgewicht)
• Gene werden in einem Donor-Vektor kloniert und dann parallel in Akzeptor-Vektoren übertragen, die eine unterschiedliche genetische Umgebung bereitstellen
• Einfache Verbindung von zwei oder mehr Genen, die in separaten Donor-Vektoren kloniert werden, mit Fusionsvektoren, die unter Verwendung einer Einrohrreaktion zusammengesetzt werden
• Das vor dem Computer zu positionierende GOI wird in ein pNFUSE-IBA-Derivat übertragen, das die intergene Region (IR) angibt:
  • IRES11: Bietet eine interne ribosomale Eintrittsstelle (IRES) aus dem Enzephalomyocarditis-Virus für die separate, kappenunabhängige Translation von nachgeschaltetem Cistron in Säugetierzellen
  • SD11: IR beinhaltet eine Shine Dalgarno (SD)-Sequenz zur Translation von Downstream-Cistron auf vergleichbarem Niveau mit dem Upstream-Cistron in Bakterienzellen
  • LINK11: Gene von Interesse werden durch eine Sequenz, die den 10-Aminosäuren-Linker GlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer kodiert, fusioniert
  • LINK12: Gene von Interesse werden durch eine Sequenz, die den 15-Aminosäuren-Linker GlySerGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySer kodiert, fusioniert
• Die Downstream zu positionierenden GOIs werden in einen pCFUSE-IBA11-Vektor übertragen (identisch, unabhängig von IR)