Invitrogen™ SuperScript™ III Erststrang-Synthese SuperMix für qRT-PCR

• Der einfache, zeitsparende Reaktionsaufbau verwendet lediglich zwei Röhrchen: einen 2X Reaktions-Mix und einen Enzym-Mix.
• Das im RT-Enzym-Mix enthaltene SuperScript III Reverse-Transkriptase-Enzymgemisch ist eine Version der M-MLV-RT, die zur Reduzierung der RNase-H-Aktivität entwickelt wurde und eine höhere thermische Stabilität aufweist. Das Enzym kann für die Synthese von cDNA bei Temperaturen von 42 °C bis 60 °C verwendet werden und bietet eine bessere Spezifität, höhere cDNA-Ausbeute und mehr Produkt in voller Länge als andere reverse Transkriptasen
• Da SuperScript III RT nicht signifikant von Ribosomal- und Transfer-RNA gehemmt wird, kann es für die Synthese von cDNA aus Gesamt-RNA verwendet werden
• Der ebenfalls im Enzymgemisch enthaltene rekombinante Ribonuklease-Inhibitor RNaseOUT ist ein RNase-Hemmprotein, das vor dem Abbau von Ziel-RNA durch eine Ribonukleasekontamination der RNA-Probe schützt

Reaktionsgemisch Das 2x Reaktionsgemisch enthält Oligo(dT)₂₀, Random-Hexamere, MgCl₂ und dNTPs in einer Puffer-Formulierung, die für qRT-PCR optimiert wurde. E. coli RNase H wird als ein separates Röhrchen im Kit geliefert, um das RNA-Template aus dem cDNA:RNA-Hybridmolekül nach der Erststrang-Synthese zu entfernen. Dies führt nachweislich zur Erhöhung der Empfindlichkeit für qRT-PCR. Verwendung von SuperScript III SuperMix für die Erststrang-Synthese Diese SuperMix-Formulierung kann verwendet werden, um weniger als 10 Kopien eines Ziel-Gens in qRT-PCR mit einem breiten dynamischen Bereich, der eine genaue Quantifizierung von einer hohen Kopienzahl von mRNA von bis zu 1 μg der Gesamt-RNA unterstützt, zu quantifizieren. Reagenzien werden für 50 oder 250 RT-Reaktionen von je 20 μl angeboten. Optimale Reaktionstemperatur: 50 °C.

PCR & Real-Time PCR, reverse Transkription