Thermo Scientific™ SureQuant™ AKT-Signalweg-Multiplexpanel (relative Quantifizierung)

Die SureQuant Quantifizierungsmodule enthalten 30 einzigartige Peptide aus 10 AKT-mTOR-Signalwegzielproteinen für die Multiplex-Quantifizierung einzigartiger Peptide mit LC und MS. SureQuant Kits verwenden Multiplex-Immunpräzipitation in Verbindung mit Massenspektrometrie für die gleichzeitige Anreicherung und Quantifizierung von Zielproteinen im AKT/mTOR-Signalweg. Jede Multiplexplatte enthält zwei Module: 1) das IP- und MS-Probenvorbereitungsmodul, das alle Reagenzien enthält, die für die Immunanreicherung von Zielproteinen mit anschließender MS-Probenvorbereitung in Lösung erforderlich sind, und 2) ein absolutes oder relatives Quantifizierungsmodul, einschließlich eines Systemeignungsstandards, sowie HeavyPeptide™ und LightPeptide™ AQUA Ultimate Mischungen.

Für die relative Quantifizierung ist eine HeavyPeptide AQUA Ultimate Mischung zur Verwendung als interner Spike-in-Standard in der Multiplex-Probe vorgesehen. Für die absolute Quantifizierung werden HeavyPeptide und LightPeptide AQUA Ultimate Mischungen mit Pierce™ 6 Proteinverdau zur Erzeugung einer Standardkurve in einer Matrix verwendet. Der Pierce™ LC-MS/MS Systemeignungsstandard (7 x 5 Mischung) ist in beiden Modulen enthalten, um den dynamischen Bereich von LC-MS/MS-Systemen zu beurteilen, bevor die Kalibrierungskurven und Proben ausgeführt werden.

Das IP- und MS-Probenvorbereitungsmodul ermöglicht hocheffektive Antigen-IP und CO-IP für die MS-Analyse. Die Zellen werden zuerst lysiert und mit einer IP-MS-verifizierten biotinylierten Antikörpermischung inkubiert. Der Antikörper-Antigen-Komplex wird dann auf MS-kompatiblen Streptavidin-Magnetbeads aufgefangen, wobei unspezifische Proteine durch Waschen mit MS-kompatiblen Puffern entfernt werden. Die Zielproteine werden mit Trypsin eluiert und sind mit der MS-Probenvorbereitung kompatibel. Die MS-Probenvorbereitung wurde so optimiert, dass sie innerhalb von 4 Stunden abgeschlossen werden kann, sodass die Probe am selben Tag von MS analysiert werden kann.

Der AKT/mTOR-Signalweg dient als regulatorischer Leitweg für Zellwachstum und -proliferation und spielt eine entscheidende Rolle in der Signalkaskade. Die aberrante Aktivierung dieses Signalweges fördert das Überleben von Tumorzellen bei vielen Krebsarten. SureQuant Kits sind ideal für die Überwachung von AKT/mTOR-Expressionsstufen, Isoformen und Phosphorylierungsstatus in einem einzigen Assay. Die Möglichkeit der gleichzeitigen Überwachung und Quantifizierung in einer einzigen Probe ist ein leistungsstarkes Werkzeug für die Beurteilung des normalen und abnormalen Zellwachstums.

SureQuant AKT-Signalweg-Multiplexpanels sind:
• Vollständig: enthält alle Reagenzien für eine erfolgreiche Überwachung der MS-Systemleistung, Probenvorbereitung und Quantifizierung von Zielproteinen und -peptiden
• Geprüft: Antikörper, Peptide und Kontrolllysat werden bzgl. der Spezifität und erfolgreichen Quantifizierung der einzelnen Zielpeptide streng getestet
• Multiplex: geeignet zur Quantifizierung von Targets im AKT/mTOR-Signalweg, RAS und p53 Isoformen
• Flexibel: modulares Format ermöglicht die reine Immunanreicherung oder in Kombination mit der relativen oder absoluten Quantifizierung