Invitrogen™ ViraPower™ BacMam Expressionssystem

Das ViraPower™ BacMam Expression System bietet BacMam pCMV-Dest Vector, Cellfectin™ II Reagent und MAX Efficiency™ DH10 Bac™ Competent Cells für einfaches rekombinationsbasiertes Klonen und Baculovirus-basierte Expression eines Zielgens. Mit der BacMam Technologie wird ein modifiziertes Insektenzellvirus (Baculovirus) als Mittel zur effizienten Abgabe und transienten Expression von Genen in Säugetierzellen mit minimalem Aufwand und minimaler Toxizität eingesetzt. Diese Technologie ermöglicht die Kontrolle über den Expressionsgrad durch die Erhöhung oder Verringerung der viralen Partikelkonzentration. In Kombination mit der Gateway™ Kloning-Technologie können verschiedene Größen von Zielgenen geklont und exprimiert werden. Größen von einem Einsatz für RNAi bis zu einem großen Gen mit Introns (38kb) wurden geklont und erfolgreich mit dem BacMam pCMV-Dest Vector exprimiert. Dieses Plasmid unterstützt verschiedene Klonierungsschemata, einschließlich Gateway™, Seamless Assembly und herkömmliches Klonen mit Restriktionsenzymen.

Der BacMam pCMV-Dest Vector enthält einen CMV-Promotor, um die konstitutive Expression des Zielgens zu fördern. Es enthält auch VSV-G-Elemente, die es Baculovirus ermöglichen, eine hohe Transduktionseffizienz zu erzielen, und ein WPRE-Element, das die transiente Expression in Säugetiersystemen verlängert. Um das erfolgreiche Klonen zu erleichtern, wurden AMPR und Gentamicin für die positive Selektion sowie Cm(R) (Chloramphenicol-Resistenzgen) für die negative Selektion aufgenommen. Nach erfolgreichem Klonen wird die Region, die die CmR enthält, durch die Einfügung ersetzt, die gegen alle Bakterien auswählt, die noch eine CmR-haltige Region haben.

Cellfectin™ II Reagenz ist eine kationische Lipid-Formulierung für die optimale Transfektion von Insektenzellen. Das System umfasst auch MAX Efficiency™ DH10 Bac™ Competent Cells, die für die Produktion von rekombinanten Baculovirus-Molekülen für die Expression eukaryotischer Proteine optimiert sind.