Invitrogen™ CellEvent™ Senescence Green Flow Cytometry Assay Kit

Das Kit enthält einen optimierten Puffer und ein fluorescein-basiertes Reagenz, das zwei Galactosidkomponenten enthält und somit ein spezifisches Zielmolekül von β-Galactosidase ist. Die Aktivierung der β-Galactosidase wird häufig als Biomarker für alternde Zellen verwendet. Dieses Hydrolase-Enzym befindet sich in Lysosomen und wandelt β-Galactoside unter sauren pH-Bedingungen zu Monosaccharide um. Das Enzym-gespaltene Produkt bleibt aufgrund der kovalenten Bindung intrazellulärer Proteine in der Zelle erhalten und sendet ein fluorogenes Signal mit einem Absorptions-/Emissionsmaximum von 490/514 nm aus.

Die Merkmale des CellEvent Seneszenz Green Flow Cytometry Assay Kits beinhalten:
• Fluoreszenznachweis von β-Galactosidase Hydrolyse durch Durchflusszytometrie
• Festzell-Assay
• Mehrfarbenkompatibilität

Wenn normale Zellen das Ende ihrer begrenzten replikativen Lebensdauer erreichen, die allgemein als Hayflick-Grenze bezeichnet wird, treten sie in eine seneszierende Phase ein, in der sie metabolisch aktiv bleiben, ohne dass sie Zelltodprozesse durchlaufen. Diese seneszierenden Zellen nehmen einen bestimmten phänotypischen Zustand an, der das Aussehen von multinukleierten Zellen, eine erhöhte Vakuolisierung, die Expression von pH-abhängiger β-Galactosidase und die morphologische Vergrößerung und Erweiterung von Zellen umfasst. Durch eine Vielzahl von Mechanismen können sie eine Rolle bei der Tumorunterdrückung, dem Tumorwachstum, dem Altern und der Gewebereparatur spielen.

β-Galactosidase befindet sich in Lysosomen und wandelt β-Galactoside unter sauren pH-Bedingungen in Monosaccharide um. Die Aktivität ist bei lysosomalem pH 4-Wert optimal, herkömmliche Assays messen jedoch bei pH 6. Es hat sich gezeigt, dass die normalisierte β-Galactosidase-Aktivität in seneszierenden Zellen doppelt so hoch ist wie in präseneszenten Zellen, unabhängig vom pH-Wert, der für Tests verwendet wird.

Das kolorimetrische Substrat für β-Galactosidase, 5-Brom-4-Chlor-3-Indolyl-β-D-Galactopyranosid (x-gal) wurde seit langem zur Erkennung metabolischer Aktivität in Zellen in vitro verwendet. Bei Hydrolyse durch β-Galaktosidase wandelt sich x-gal in einen blauen Niederschlag um, der nicht für Durchflusszytometrie-Assays geeignet ist. Deshalb haben wir ein empfindliches, fluoreszierendes Substrat für β-Galaktosidase entwickelt, das in Durchflusszytometrie-Assays für den Nachweis alternder Zellen verwendet werden kann.