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Molecular Probes™ Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 647 Durchflusszytometrie-Assay-Kit
Artikelnummer.
12043795
Lieferant
Molecular Probes™
Lieferanten-Nr.
C10424
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Description
Das Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 647 Durchflusszytometrie-Assay-Kit ist ein einfacher, stabilerer Assay für die Analyse der DNA-Replikation in proliferierenden Zellen im Vergleich zu herkömmlichen BrdU-Methoden. Neu synthetisierte DNA wird mit dem 633/5 nm-Laser des Durchflusszytometers analysiert.
Präzise – Hervorragende Ergebnisse im Vergleich zu BrdU-Assays
Schnell – Ergebnisse schon nach 90 Minuten
Kostengünstig – Mehr Assays pro Kit
Auswahlhilfe für alle Click-iT™ EdU und Click-iT™ Plus EdU-Assays für die Durchflusszytometrie anzeigen.
Eine fortschrittliche Methode, die Ihnen bessere Ergebnisse liefert als BrdU
Die genaueste Methode der Proliferationsanalyse ist die direkte Messung der DNA-Synthese. Ursprünglich wurde dies durch die Einbindung radioaktiver Nukleoside wie 3H-Thymidin durchgeführt. Diese Methode wurde durch die Antikörper-basierte Erkennung des Nukleosid-Analogons Bromdesoxyuridin (BrdU) ersetzt. Click-iT™ Plus EdU Durchflusszytometrie-Assay-Kits sind eine neuartige Alternative zum BrdU-Assay. EdU (5-Ethinyl-2´-Desoxyuridin) ist ein Thymidin-Analogon, das während der aktiven DNA-Synthese in die DNA eingebaut wird. Die Erkennung beruht auf Klick-Chemie, einer Kupfer-katalysierten kovalenten Reaktion zwischen einem Azid und einem Alkin. In dieser Anwendung befindet sich das Alkin auf der Ethinylverbindung der EdU, während das Azid mit dem Farbstoff Alexa Fluor™ 488, Alexa Fluor™ 647 oder Pacific BlueTM gekoppelt ist. Standardmethoden der Durchflusszytometrie werden zur Bestimmung des prozentualen Anteils der S-Phase-Zellen in der Population verwendet (Abb. 1).
Unter milden Bedingungen ist die Verwendung mit Zellzyklus-Farbstoffen und Antikörpern möglich
Die Vorteile der Click-iT™ EdU-Markierung sind bei der Durchführung des Assays leicht erkennbar (Abb. 2). Die geringe Größe des Farbstoff-Azids ermöglicht den effizienten Nachweis des eingebauten EdU-Nukleosids unter schonenden Bedingungen, während die standardmäßige Aldehyd-basierte Fixierung und Lösungsmittelpermeabilisierung für das Click-iT™ Detektionsreagenz ausreichend sind, um Zugang zur DNA zu erhalten. Dies steht im Gegensatz zu BrdU-Assays, die eine Denaturierung der DNA (mit HCI, Wärme oder Verdauung mit DNase) zur Exposition des BrdU erfordern, so dass es mit einem anti-BrdU-Antikörper nachgewiesen werden kann. Bei Anwendung der HCl-Methode kann eine Probenverarbeitung für das BrdU-Assay zu Signalveränderungen in der Zellzyklus-Verteilung, sowie zu einer Zerstörung der Antigenerkennungsstellen führen. Im Gegensatz dazu ist das anwenderfreundliche EdU-Zellproliferationskit mit Zellzyklus-Farbstoffen kompatibel. Dieses EDU-Assay-Kit kann auch mit Antikörpern gegen Oberflächen- und intrazelluläre Marker gebündelt werden.
Schnelles und einfaches Protokoll
Das Click-iT™ EDU-Protokoll basiert auf den Aldehydfixierungs- und Lösungsmittelpermeabilisierungsschritten zur immunhistochemischen Antikörper-Markierung, doch EDU ist auch mit mit anderen Fixierungs-/Permeabilisierungswirkstoffen,
einschließlich Saponin und Methanol, kompatibel. Nur fünf Arbeitsgänge sind zur Vorbereitung Ihrer Zellproliferationsdaten-Analyse erforderlich:
Behandlung von Zellen mit EdUM
Fixieren und Permeabilisieren von Zellen
Nachweis von S-Phase-Zellen mit Click-iT™ Nachweis-Cocktail für die Dauer von 30 Minuten
Einmal waschen
Analyse
Genaue Ergebnisse auf kostengünstige Weise
Durch Erhöhung der Assay-Anzahl pro Kit ist das Click-IT™ EdU Alexa Fluor™ 647 Durchflusszytometrie-Assay-Kit kostengünstiger als herkömmliche BrdU-Assays und bestens für umfangreiche Experimente geeignet.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für therapeutische oder diagnostische Zwecke bei Menschen und Tieren vorgesehen.
Auswahlhilfe für alle Click-iT™ EdU und Click-iT™ Plus EdU-Assays für die Durchflusszytometrie anzeigen.
Eine fortschrittliche Methode, die Ihnen bessere Ergebnisse liefert als BrdU
Die genaueste Methode der Proliferationsanalyse ist die direkte Messung der DNA-Synthese. Ursprünglich wurde dies durch die Einbindung radioaktiver Nukleoside wie 3H-Thymidin durchgeführt. Diese Methode wurde durch die Antikörper-basierte Erkennung des Nukleosid-Analogons Bromdesoxyuridin (BrdU) ersetzt. Click-iT™ Plus EdU Durchflusszytometrie-Assay-Kits sind eine neuartige Alternative zum BrdU-Assay. EdU (5-Ethinyl-2´-Desoxyuridin) ist ein Thymidin-Analogon, das während der aktiven DNA-Synthese in die DNA eingebaut wird. Die Erkennung beruht auf Klick-Chemie, einer Kupfer-katalysierten kovalenten Reaktion zwischen einem Azid und einem Alkin. In dieser Anwendung befindet sich das Alkin auf der Ethinylverbindung der EdU, während das Azid mit dem Farbstoff Alexa Fluor™ 488, Alexa Fluor™ 647 oder Pacific BlueTM gekoppelt ist. Standardmethoden der Durchflusszytometrie werden zur Bestimmung des prozentualen Anteils der S-Phase-Zellen in der Population verwendet (Abb. 1).
Unter milden Bedingungen ist die Verwendung mit Zellzyklus-Farbstoffen und Antikörpern möglich
Die Vorteile der Click-iT™ EdU-Markierung sind bei der Durchführung des Assays leicht erkennbar (Abb. 2). Die geringe Größe des Farbstoff-Azids ermöglicht den effizienten Nachweis des eingebauten EdU-Nukleosids unter schonenden Bedingungen, während die standardmäßige Aldehyd-basierte Fixierung und Lösungsmittelpermeabilisierung für das Click-iT™ Detektionsreagenz ausreichend sind, um Zugang zur DNA zu erhalten. Dies steht im Gegensatz zu BrdU-Assays, die eine Denaturierung der DNA (mit HCI, Wärme oder Verdauung mit DNase) zur Exposition des BrdU erfordern, so dass es mit einem anti-BrdU-Antikörper nachgewiesen werden kann. Bei Anwendung der HCl-Methode kann eine Probenverarbeitung für das BrdU-Assay zu Signalveränderungen in der Zellzyklus-Verteilung, sowie zu einer Zerstörung der Antigenerkennungsstellen führen. Im Gegensatz dazu ist das anwenderfreundliche EdU-Zellproliferationskit mit Zellzyklus-Farbstoffen kompatibel. Dieses EDU-Assay-Kit kann auch mit Antikörpern gegen Oberflächen- und intrazelluläre Marker gebündelt werden.
Schnelles und einfaches Protokoll
Das Click-iT™ EDU-Protokoll basiert auf den Aldehydfixierungs- und Lösungsmittelpermeabilisierungsschritten zur immunhistochemischen Antikörper-Markierung, doch EDU ist auch mit mit anderen Fixierungs-/Permeabilisierungswirkstoffen,
einschließlich Saponin und Methanol, kompatibel. Nur fünf Arbeitsgänge sind zur Vorbereitung Ihrer Zellproliferationsdaten-Analyse erforderlich:
Genaue Ergebnisse auf kostengünstige Weise
Durch Erhöhung der Assay-Anzahl pro Kit ist das Click-IT™ EdU Alexa Fluor™ 647 Durchflusszytometrie-Assay-Kit kostengünstiger als herkömmliche BrdU-Assays und bestens für umfangreiche Experimente geeignet.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für therapeutische oder diagnostische Zwecke bei Menschen und Tieren vorgesehen.
Specifications
Specifications
| Inhalt und Lagerung | Enthält EdU (5-Ethynyl-2‘-Deoxyuridin), Alexa Fluor™ 647-Azid, wasserfreies Dimethylsulfoxid (DMSO), Click-iT™ Fixiermittel, Click-iT™ saponin-basierten Permeabilisierungs- und Waschpuffer, Kupfer(II)-Sulfat und Click-iT™ EdU-Pufferadditiv. |
| Nachweisverfahren | Fluoreszent |
| Zur Verwendung mit (Geräte) | Durchflusszytometer |
| Produkttyp | Durchflusszytometrie-Assaykit |
| Farbstofftyp | Alexa Fluor™ 647 |
| Emission | 650⁄670 |
| Format | Röhrchen |
| Produktlinie | Click-iT |
| Menge | 50 Assays |
| Versandbedingung | Raumtemperatur |
Safety and Handling
Product Identifier
- 647 Flow Cytometry Assay Kit
- Gefahr
- LANGFRISTIG GEWÄSSERGEFÄHRDEND Chronisch 3
- Karzinogenität Kategorie 1
- Schwere Augenschädigung/Augenreizung Kategorie 1
- Keimzellmutagenität Kategorie 2
- Sensibilisierung der Haut Kategorie 1
- Spezifische Zielorgan-Toxizität bei wiederholter Exposition Kategorie 2
- H317-Kann allergische Hautreaktionen verursachen.
- H318-Verursacht schwere Augenschäden.
- H341-Kann vermutlich genetische Defekte verursachen.
- H350-Kann Krebs erzeugen.
- H371-Kann die Organe schädigen.
- H412-Schädlich für Wasserorganismen, mit langfristiger Wirkung.
- P201-Vor Gebrauch besondere Anweisungen einholen.
- P261-Einatmen von Staub/Rauch/Gas/Nebel/Dampf/Aerosol vermei den.
- P264-Nach Gebrauch gründlich waschen.
- P270-Bei Gebrauch nicht essen, trinken oder rauchen.
- P280-Schutzhandschuhe/Schutzkleidung/Augenschutz/Gesichtsschutz tragen.
- P302+P352-BEI BERÜHRUNG MIT DER HAUT: Mit viel Wasser/waschen.
- P305+P351+P338-BEI KONTAKT MIT DEN AUGEN: Einige Minuten lang behutsam mit Wasser spülen. Vorhandene Kontaktlinsen nach Möglichkeit entfernen. Weiter spülen.
- P308+P313-BEI Exposition oder falls betroffen: Ärztlichen Rat einholen/ärztliche Hilfe hinzuziehen.
- P310-Sofort GIFTINFORMATIONSZENTRUM/Arzt/anrufen.
- P332+P313-Bei Hautreizung: Ärztlichen Rat einholen/ärztliche Hilfe hinzuziehen.
- P501b-Inhalt/Behälter gemäß den örtlichen/regionalen/nationalen/internationalen Vorschriften zuführen.
- MIXTURE LIST-Contain: Paraformaldehyde
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
Product Title
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