MP Biomedicals™ FastCellular™ Seneszenz-Nachweiskit, SPiDER-ΒGal

Zelluläre Seneszenz ist ein Phänomen, bei dem normale Zellen aufhören, sich zu teilen, und einen Zustand irreversiblen Wachstumsstillstands erreichen. Sie ist einer der fundamentalsten Aspekte des Zellverhaltens, und es wird allgemein angenommen, dass sie mit Tumorunterdrückungsmechanismen und einer zugrunde liegenden Ursache des Alterns in Zusammenhang steht. Seneszenz-assoziierte Β-Galactosidase (SA-Β-gal), die in seneszenten Zellen überexprimiert ist, wurde häufig als Marker für zelluläre Seneszenz verwendet. Obwohl X-gal ein bekanntes Reagenz für den Nachweis von SA-Β-gal ist, hat X-gal folgenden Nachteile: 1) Erfordernis fester Zellen aufgrund schlechter Zelldurchlässigkeit, 2) niedrige quantitative Fähigkeit aufgrund der Schwierigkeit bei der visuellen Unterscheidung zwischen gefärbten und nicht gefärbten Zellen, 3) Erfordernis langer Färbezeiten.

Um die Nachteile der Verwendung von X-gal zu überwinden, verwenden wir ein neues Reagenz und eine neue Methode für den Nachweis von zellulärer Seneszenz. SPiDER-ΒGal bietet aufgrund der erhöhten Zelldurchlässigkeit und Retention in Zellen eine erhöhte Empfindlichkeit beim Nachweis von SA-Β-gal. Im Vergleich zur X-gal-Methode kann das FastCellular Seneszenz-Nachweiskit sowohl für lebende als auch für feste Zellen verwendet werden, da wir Bafilomycin A1 zur spezifischen Hemmung der endogenen Β-Galactosidase-Aktivität in lebenden Zellen bereitstellen und so die Nachweisspezifität für lebende Zellen erhöhen. Bei festen Zellen ist SA-Β-gal mit SPiDER-ΒGal und Mcllvain-Puffer nachweisbar (pH 6,0, siehe Protokoll für Festzellen-Assays). Da SPiDER-ΒGal nach der Reaktion mit SA-Β-gal eine starke und stabile Fluoreszenz aussendet, kann es mittels Durchflusszytometrie auf die quantitative Analyse angewendet werden. Außerdem beträgt die Färbezeit nur 30 Minuten. Das Kit enthält eine 6-Well-Platte mit einer Einheit SPiDER-ΒGal und einer Einheit Bafilomycin A1

Vorteile der Verwendung des FastCellular Seneszenz-Nachweiskit:

• Höhere Empfindlichkeit durch neue fluorogene Nachweissonde
• Anwendbar auf lebende Zellen und feste Gewebe
• Fähigkeit zur Quantifizierung von SA-Β-gal in zellulären Seneszenz-Assays
• Kurze Färbezeit (30 min)