Thermo Scientific™ Eco105I (SnaBI) (10 U/μL)

5'...T A C▵G T A...3'

3'...A T G▵C A T...5'

Bedingungen für 100 % Aktivität:

• 1x Puffer Tango™:
• 33 mM Tris-acetat (pH 7,9 bei 37°C), 10 mM Mg-Acetat, 66 mM K-Acetat und 0,1 mg/ml BSA.Inkubat bei 37°C

Lagerungspuffer:

• Eco105I wird geliefert in:10 mM Tris-HCl (pH 7,4 bei 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 1 mM Phenylmethylsulfonylfluorid, 0,2 mg/ml BSA und 50 % (v/v) Glycerin

Ligation und erneutes Schneiden:

• Nach 10-fachem Verdau mit Eco105I können über 80 % der M13mp18-DNA-Fragmente in einem Reaktionsgemisch mit 20 bis 40 U von T4 DNA-Ligase/1 μg Fragmente und 10 % PEG ligiert werden
• Mehr als 90% davon können erneut geschnitten werden

Methylierungseffekte:

• Dam: keine Überlappung — keine Auswirkung
• Dcm: keine Überlappung — keine Auswirkung
• CpG: vollständige Überlappung — blockiert
• EcoKI: keine Überlappung — keine Auswirkung
• EcoBI: keine Überlappung — keine Auswirkung

Verdauung von Agarose-eingebetteter DNA:

• Es sind mindestens 5 Units der Enzyme für den vollständigen Verdau von 1 μg in Agarose eingebetteter Lambda-DNA in 16 Stunden erforderlich

Hinweis:

Ein mehr als 15-facher Überverdau mit Eco105I kann zu Star-Aktivität führen.