Invitrogen™ DAF-FM Diacetate (4-Amino-5-Methylamino-2',7'-Difluorofluorescein Diacetate)

Es ist im Wesentlichen nicht fluoreszierend, bis es mit NO zu einem fluoreszierenden Benzotriazol reagiert. Die Fluoreszenz von DAF-FM kann mit jedem Instrument nachgewiesen werden, das für die Erkennung von Fluoreszein geeignet ist, z. B. Durchflusszytometer, Mikroskope, Mikrotiterplatten-Reader und Fluorometer.

• Ex/Em von DAF-FM: ca. 495/515 nm
• Ein lyophilisiertes Produkt sollte mit DMSO aufgelöst und dann auf einen wässrigen Puffer zur Herstellung einer funktionsfähigen Lösung gegeben werden
• DAF-FM-Diazetat ist membrangängig und diffundiert passiv durch Zellmembranen; sobald es sich einmal in der Zelle befindet, wird es in eine nicht membrangängige Form umgewandelt
• Puffer mit Rinderserumalbumin (BSA) und Phenolrot wirken sich möglicherweise auf die Fluoreszenz aus und sollten mit Vorsicht verwendet werden
• Die Fluoreszenzquantenausbeute von DAF-FM beträgt ca. 0,005, erhöht sich aber nach Reaktion mit NO etwa auf das 160-fache (∼0,81)
• Bewertung der NO-Produktion in Lymphoblasten mit Transaldolase-Mangel mittels Durchflusszytometrie
• Nachweis der NO-Akkumulation in embryonalen kortikalen Neuronen nach Neurotrophinstimulation
• In-vivo-Bildgebung von NO beim Zebrabärbling

• Intravitaler mikroskopischer Nachweis der NO-Erzeugung im Zusammenhang mit der Angiogenese bei Mäusen
• Quantifizierung von ATP-induzierter NO-Freisetzung in Kaninchenthrombozyten
• Die Bandbreite des NO-Adduktes von DAF-FM ist oberhalb eines pH-Wertes von 5,5 unabhängig vom pH-Wert
• Das NO-Addukt von DAF-FM ist deutlich photostabiler als das von DAF-2, dies bedeutet zusätzliche Zeit für die Bilderfassung
• DAF-FM reagiert empfindlicher auf NO als DAF-2 (NO-Nachweisgrenze bei DAF-FM: ca. 3 nM, im Vergleich dazu bei DAF-2: ca. 5 nM)

Weitere Produktinformationen finden Sie im Molecular Probes™ Handbuch.

Zellanalyse, Zellmetabolismus, Zellviabilität, Proliferation und Funktion, Nitritoxidforschung, Nitrooxidativ-Stress