Invitrogen™ EnzChek™ Direct Phospholipase C Assay Kit

Dieses Kit ermöglicht die kontinuierliche Überwachung der Aktivität der Phosphotidylcholin-spezifischen Phospholipase C (PLC) in biochemischen Assays auf Mikrotiterplattenbasis. Der Assay verwendet ein PCL-selektives fluorogenes Substrat, das bei Spaltung eine hellgrüne Emission abgibt. PC-PLC spielt eine entscheidende Rolle in vielen Zellsignalwegen, die an Apoptose und Zellüberleben beteiligt sind, sowie bei Krankheiten von Krebs bis HIV1-7. Der Assay verwendet ein Glycerophospho-Ethanolamin mit einer farbstoffmarkierten sn-2-Acylkette als Substrat für PC-PLC. Substratspaltung durch PC-PLC, bevor das Phosphat das farbstoffmarkierte Diacylglycerin freisetzt, das ein positives Fluoreszenzsignal erzeugt, welches kontinuierlich gemessen werden kann. Das Reaktionsprodukt hat ein Absorptions- und Fluoreszenz-Emissionsmaximum von 509 nm bzw. 516 nm. Mit aufgereinigtem Enzym aus Bacillus cereus kann der Assay nach einer Stunde bei Raumtemperatur schon 10 mU/ml PC-PLC erkennen. Das Kit hat sich als nützlich für die Charakterisierung der PC-PLC-Hemmung erwiesen, und da es eine direkte Messung bietet, wird das Potenzial für falsch positive Ergebnisse in einem kombinierten Screening eliminiert.

• Jedes Kit enthält ausreichend Reagenzien für 10 Mikrotiterplatten, wobei 200 μl Volumen im 96-Well Format verwendet werden

Enzym- und Protein-Aktivitäts-Assays, Lipase- und Phospholipase-Aktivität, Proteine, Expression, Isolierung und Analyse