Learn More
Artikelnummer. 10621441
Marke: Thermo Scientific™ EL0012
Bitte melden Sie sich an, um diesen Artikel zu kaufen. Sie benötigen ein Web-Konto? Registrieren Sie sich noch heute!
Beschreibung
Katalysiert die Bildung einer Phosphodiesterbindung zwischen nebeneinanderliegenden 5‘-Phosphat- und 3‘-Hydroxy-Enden in Doppelstrang-DNA oder -RNA mit der Thermo Scientific™ T4 DNA-Ligase. Das Enzym repariert einsträngige Einbrüche (sog. Nicks) in Duplex-DNA und -RNA oder DNA/RNA-Hybriden. Es verbindet darüber hinaus DNA-Fragmente mit Sticky- oder Blunt-Kettenenden, übt aber auf einsträngige Nukleinsäuren keine Aktivität aus.
Die T4 DNA Ligase erfordert ATP als Kofaktor.
Highlights
- Aktiv in Thermo Scientific Restriktionsenzym, PCR und RT-Puffern (bei Lieferung mit ATP)
- Schnell – Die Sticky-End-Ligation ist innerhalb von 10 Minuten bei Raumtemperatur abgeschlossen.
- Im Lieferumfang enthalten: PEG-Lösung für effiziente Blunt-End-Ligationen
Anwendungen
- Klonen von DNA-Fragmenten, die aus Restriktionsenzymen erzeugt wurden
- Klonen von PCR-Produkten
- Verschmelzen doppelsträngiger Oligonukleotid-Linker bzw. -Adaptoren mit DNA
- Ortsspezifische Mutagenese
- Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP, Verfahren zur Herstellung eines genetischen Fingerabdrucks)
- Ligase-vermittelter RNA-Nachweis (siehe Referenz 3)
- Nick-Reparatur in Duplex-DNA, RNA oder DNA/RNA-Hybriden
- Selbstzirkulation linearer DNA.
Hinweise
- Die Bindung von T4 DNA Ligase an DNA kann zu einer Verschiebung der Bande im Agarosegel führen. Um dies zu vermeiden, die Proben mit 6X DNA-Ladefarbstoff & SDS-Lösung 5 Minuten lang bei 70 °C oder 10 Minuten lang bei 65 °C inkubieren und dann vor der Elektrophorese auf Eis kühlen.
- Bei der Transformation darf das Volumen des Ligationsreaktionsgemischs das Volumen der kompetenten Zellen nicht um mehr als 10 % überschreiten.
- Vor der Elektrotransformation muss die T4 DNA Ligase durch Zentrifugationssäule oder Chloroform-Extraktion aus dem Ligasegemisch entfernt werden. Die extrahierte DNA kann noch weiter mit Ethanol ausgefällt werden.
Spezifikation
Spezifikation
| Konzentration | 5 U/μl |
| Enzym | DNA-Ligase |
| Kompatibler Puffer | 10x T4-DNA-Ligasepuffer |
| Menge | 5 x 1000 E |
| Produkttyp | T4 DNA-Ligase |
Sicherheit und Handhabung
- T4 DNA Ligase (5 U/µL)
- Achtung
- Schwere Augenschädigung/Augenreizung Kategorie 2
- H319-Verursacht schwere Augenreizung.
- P264-Nach Gebrauch gründlich waschen.
- P280-Schutzhandschuhe/Schutzkleidung/Augenschutz/Gesichtsschutz tragen.
- P305+P351+P338-BEI KONTAKT MIT DEN AUGEN: Einige Minuten lang behutsam mit Wasser spülen. Vorhandene Kontaktlinsen nach Möglichkeit entfernen. Weiter spülen.
- P337+P313-Bei anhaltender Augenreizung: Ärztlichen Rat einholen/ärztliche Hilfe hinzuziehen.
- MIXTURE LIST-Enthält: (R*,R*)-1,4-dimercapto-2,3-butanediol
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
Indem Sie auf Absenden klicken, erklären Sie sich damit einverstanden, dass Fisher Scientific sich mit Ihnen in Verbindung setzen kann, um Ihr Feedback in diesem Formular zu bearbeiten. Wir werden Ihre Informationen nicht für andere Zwecke weitergeben. Alle bereitgestellten Kontaktinformationen werden in Übereinstimmung mit unserer Datenschutzrichtlinie aufbewahrt. Datenschutzrichtlinie.