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Thermo Scientific™ T4 DNA Ligase (5 U/μl)

T4 DNA Ligase katalysiert die Bildung einer Phosphodiesterbindung zwischen nebeneinanderliegenden 5‘-Phosphat- und 3‘-Hydroxy-Enden in Doppelstrang-DNA oder -RNA

Marke:  Thermo Scientific™ EL0011

69.42 EUR gültig bis 2024-12-31
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Artikelnummer. 10723941

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Beschreibung

Beschreibung

Katalysiert die Bildung einer Phosphodiesterbindung zwischen nebeneinanderliegenden 5‘-Phosphat- und 3‘-Hydroxy-Enden in Doppelstrang-DNA oder -RNA mit der Thermo Scientific™ T4 DNA-Ligase. Das Enzym repariert einsträngige Einbrüche (sog. „Nicks“) in Duplex-DNA und -RNA oder DNA/RNA-Hybriden. Es verbindet darüber hinaus DNA-Fragmente mit Sticky- oder Blunt-Kettenenden, übt aber auf einsträngige Nukleinsäuren keine Aktivität aus.

Die T4 DNA Ligase erfordert ATP als Kofaktor.

Highlights

  • Aktiv in Thermo Scientific Restriktionsenzym, PCR und RT-Puffern (bei Lieferung mit ATP)
  • Schnell – Die Sticky-End-Ligation ist innerhalb von 10  Minuten bei Raumtemperatur abgeschlossen.
  • Im Lieferumfang enthalten: PEG-Lösung für effiziente Blunt-End-Ligationen

Anwendungen

  • Klonen von DNA-Fragmenten, die aus Restriktionsenzymen erzeugt wurden
  • Klonen von PCR-Produkten
  • Verschmelzen doppelsträngiger Oligonukleotid-Linker bzw. -Adaptoren mit DNA
  • Ortsspezifische Mutagenese
  • Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP, Verfahren zur Herstellung eines genetischen Fingerabdrucks)
  • Ligase-vermittelter RNA-Nachweis (siehe Referenz  3)
  • Nick-Reparatur in Duplex-DNA, RNA oder DNA/RNA-Hybriden
  • Selbstzirkulation linearer DNA.

Hinweise

  • Die Bindung von T4 DNA Ligase an DNA kann zu einer Verschiebung der Bande im Agarosegel führen. Um dies zu vermeiden, die Proben mit 6X DNA-Ladefarbstoff & SDS-Lösung 5 Minuten lang bei 70°C oder 10 Minuten lang bei 65°C inkubieren und dann vor der Elektrophorese auf Eis kühlen.
  • Bei der Transformation darf das Volumen des Ligationsreaktionsgemischs das Volumen der kompetenten Zellen nicht um mehr als 10 % überschreiten.
  • Vor der Elektrotransformation muss die T4 DNA Ligase durch Zentrifugationssäule oder Chloroform-Extraktion aus dem Ligasegemisch entfernt werden. Die extrahierte DNA kann noch weiter mit Ethanol ausgefällt werden.
Spezifikation

Spezifikation

5 U/μl
10x T4-DNA-Ligasepuffer
T4 DNA-Ligase
DNA-Ligase
1000 E
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