Thermo Scientific™ T4 DNA Ligase (5 U/µL)

Beschreibung

Überblick

• Aktiv in Thermo Scientific Restriktionsenzym, PCR und RT-Puffern (bei Lieferung mit ATP)
• Schnell – eine Sticky-End-Ligation lässt sich bei Raumtemperatur innerhalb von 10 Minuten abschliessen
• Im Lieferumfang enthalten: PEG-Lösung für effiziente Blunt-End-Ligationen

Anwendungen

• Klonen von DNA-Fragmenten, die aus Restriktionsenzymen erzeugt wurden
• Klonen von PCR-Produkten
• Verschmelzen doppelsträngiger Oligonukleotid-Linker bzw. -Adaptoren mit DNA
• Vor Ort gesteuerte Mutagenese
• Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP, Verfahren zur Herstellung eines genetischen Fingerabdrucks)
• Ligase-vermittelte RNA-Detektion ( siehe  Referenz 3)
• Nick-Reparatur in Duplex-DNA, RNA oder DNA/RNA-Hybriden
• Selbstzirkulation linearer DNA.

Hinweise

• Die Bindung von T4-DNA-Ligase an die DNA kann zu einem Bandensprung des Agarose-Gels führen. Um das zu vermeiden, müssen die Proben mit 6x DNA-Ladepuffer & SDS-Lösung 5 Min. bei 70 °C oder 10 Minuten bei 65 °C inkubiert und vor der Elektrophorese gekühlt werden.
• Die Menge des Ligationsreaktionsgemischs darf nicht mehr als 10 % der kompetenten Zellmenge des Transformationsvorgangs betragen.
• Vor der Elektrotransformation muss die T4-DNA-Ligase durch eine Spin-Säule oder Chloroform-Extraktion aus dem Ligasegemisch entfernt werden. Die extrahierte DNA kann noch weiter mit Ethanol ausgefällt werden.