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Invitrogen™ ViraPower™ HiPerform™ T-Rex™ Gateway™ Expressionssystem
Beschreibung
Dieses Kit kombiniert Invitrogen’ ViraPower™ HiPerform™ Lentiviral, T-REx™ und Gateway™ Technologien zur einfachen, rekombinationsbasierten Klonierung und lentiviralbasierten regulierten (Tetracyclin-induzierbaren), hochwertigen Expression eines Zielgens in teilenden und nicht teilenden Säugetierzellen. Der pLenti6.3⁄ TO⁄ V5-DEST-Vektor verfügt über zwei genetische Schlüsselelemente, die ihn zu einem HiPerform™-Vektor machen: dem posttranskriptionalen regulatorischen Element des Waldmurmeltiers (WPRE) und der zentralen Polypurin-Trakt (cPPT) Sequenz des HIV-1-Integrasegens zur mindestens 4-fachen Erhöhung der Proteinexpression verglichen mit Vektoren ohne diese Elemente.
Vorteile
- Erzeugt ein replikationsunfähiges Lentivirus für die Transduktion von sich teilenden und sich nicht teilenden Säugetierzellen
- Einfaches auf Rekombination basierende Klonierung mit Gateway™ Technologie
- Stabile, mit Tetracyclin regulierte Langzeit-Expression
- Verbesserte Proteinexpression, bis zu 4-fach oder mehr, im Vergleich zu herkömmlichen lentiviralen Expressionssystemen
Hauptmerkmale
- WPRE (posttranskriptionales regulatorisches Element des Waldmurmeltiers) aus dem Waldmurmeltier-Hepatitisvirus erhöht die Transgenexpression und den cPPT (zentralen Polypurintrakt) aus dem HIV-1-Integrasegen sowie die Kopienzahl des im Wirtsgenom integrierten Lentivirus und somit den Virustiter. Gemeinsam erzeugen WPRE und cPPT in den meisten Zelltypen mindestens eine vierfache Zunahme der Proteinexpression im Vergleich zu anderen Vektoren, die diese Elemente nicht enthalten.
- Hybrid-Promotor, bestehend aus dem CMV-Promoter (humanes Cytomegalievirus) und zwei Tetracyclin-Operator-2-Stellen (TetO2), für eine hohe, regulierte Expression des Zielgens
- Blasticidin-Selektionsmarker für eine stabile Selektion unter Kontrolle des SV40-Promotors
Das Kit enthält
- ViraPower™ HiPerform™ T-Rex™ Gateway™ Vektorkit
- ViraPower™ Bsd Lentivirus-Support-Kit
- 293FT Zelllinie
- Gateway™ LR Clonase™ II Plus Enzymgemisch
- One Shot™ Stbl3™ chemisch kompetente E. coli
- Geneticin™
- pENTR™ Gus Positiv-Kontrollplasmid
Spezifikation
Spezifikation
| Bakterielle Antibiotikaresistenz | Ampicillin (AmpR), Blasticidin (BsdR) |
| Inhalt und Lagerung | Inhalt Das ViraPower™ HiPerform™ T-REx™ Gateway™ Expressionssystem umfasst die folgenden Komponenten: • ViraPower™ HiPerform™ T-REx™ Gateway™ Vektor-Kit (Kat.-Nr. A11144) mit: • ViraPower™ BSD lentivirales Support-Kit (Kat.-Nr. K497000) mit: • 293FT-Zelllinie (Kat.-Nr. R70007): 1 Fläschchen mit 3 x 106 gefrorenen Zellen in 1 ml Gefriermedium. • Gateway™ LR Clonase™ II Plus Enzymgemisch (Kat.-Nr. 12538120): 40 μl Gateway™ LR Clonase™ II Plus Enzymgemisch und 40 μl Proteinase-K-Lösung in einer Konzentration von 2 μg⁄ml. • One Shot™ Stbl3™ chemisch kompetente E. coli (Kat.-Nr. C737303) 21 x 50 μl Stbl3™ Zellen, 6 ml S.O.C. Medium und 50 μl pUC19-Kontroll-DNA (10 pg⁄μl). • Geneticin™ (Kat.-Nr. 10131035): 20 ml Geneticin™ Lösung (50 mg⁄ml). • pENTR™ Gus positives Kontrollplasmid Lagerung • Vektoren: -20 °C • ViraPower™ Packaging-Mix: -20 °C • LR Clonase™ II Plus Enzymgemisch: -20 °C für eine Lagerung von bis zu 6 Monaten, -80 °C für die langfristige Lagerung • Tetracyclin: -20 °C (vor Licht schützen) • Blasticidin: -20 °C • Geneticin: 4 °C oder -20 °C • Lipofectamine™ 2000: 4 °C (nicht einfrieren) • One Shot™ Stbl3™ chemisch kompetente E. coli: -80 °C • 293 FT-Zellen: Flüssiger Stickstoff • pENTR™ Gus Positivkontrolle: -20 °C |
| Klonierungsmethode | Gateway™ |
| Konstitutives oder induktives System | Induzierbar |
| Liefertyp | Lentiviral |
| Zelltyp | Gehäuse 293-FT |
| Format | Kit |
| Promoter | CMV/TO |
| Vector | pLenti |
| Gateway Enzym | LR Clonase™ II Plus, LR Clonase™ II |
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Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
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